放射免疫测定

基本原则:

放免实验中，过量的标记抗原*Ag和未标记抗原Ag(即待测抗原)与少量抗体(Ab)竞争结合。

如果被测缀合物(*Ag-Ab)的放射性高，则意味着分析物的浓度低。

如果被测缀合物的放射性低，则意味着分析物的浓度高。通过对标准曲线的分析，可以计算出待测物的浓度。

1960年，美国学者亚洛和贝尔松建立了放射免疫分析法，首次用于测定糖尿病患者血浆中的胰岛素含量。这是中国法律在医学和生物学领域的重大突破，开辟了医学检验史上的新纪元。它使那些原本被认为太小而无法测量、具有重要生物学意义的物质得以精确量化，从而为进一步揭开生命之谜开辟了新的道路，使人们在分子水平上重新认识一些生命现象的生化和生理基础成为可能。在随后的30年里，内分泌科学的快速进步充分证明了这种超微量分析技术的巨大推动力。1977年，这项技术的发明人获得了诺贝尔生物医学奖。然后这种全新的技术迅速渗透到医学科学的其他领域，如病毒学、药理学、血液学、免疫学、法医学、肿瘤学，以及其他与医学生物学相关的学科，如农业科学、生态学、环境科学。放射免疫分析的物质已经从激素扩展到几乎所有的生物活性物质。我们对放射免疫分析的研究始于1962，并迅速发展和普及，极大地促进了我国生物医学的进步。(一)RIA的优势

放射免疫分析有许多其他分析方法无法比拟的优点。它不仅具有免疫反应的高特异性，而且具有放射性测量的高灵敏度，因此可以准确测定各种极微量的具有免疫活性的物质。

1.灵敏度高的一般化学分析方法的检出限为10 ~ 10g，而RIA通常为10(纳克，ng)，10g(皮克，pg)，甚至10g(纳克，fg)，10g。

2.特异性强由于抗原抗体免疫反应的特异性很强，所以检测的对象必须是相应的抗原。好的特异性抗体可以识别化学结构非常相似的物质，甚至可以识别立体异构体。

3.应用广泛据不完全统计，至少有300种生物活性物质建立了RIA。它可以应用于几乎所有激素(包括肽类和甾醇类)的分析，也可以应用于各种蛋白质、肿瘤抗原、病毒抗原、细菌抗原、寄生虫抗原以及一些小分子(如环核苷酸)和药物(如地高辛和洋地黄苷)的分析，而且应用范围还在不断扩大。近年来，由于小分子半抗原制备抗体技术的巨大发展，预计几乎所有的生物活性物质，只要其含量不低于RIA的检测限，都可以建立合适的RIA方法。

4.操作简单。RIA需要的试剂种类不多，可以做成试剂盒。加样程序简单，一次可分析大量样品，样品消耗量也小；反应时间不长；测量和数据处理容易实现自动化；RIA是一种体外分析技术，对患者没有辐射危害。

(二)RIA的缺点

1.免疫反应只能检测到具有免疫活性的物质，而丧失免疫活性的生物活性物质是检测不到的。因此，RIA结果可能与生物测定结果不一致。

2.由于生化试剂的使用，其稳定性受多种因素影响，需要一套质量控制措施来保证结果的可靠性。

3.灵敏度受限于方法本身的工作原理，体内一些含量极低的物质还无法测定。

4.因为放免是一个竞争反应，被测物质和标准物质都不能参与反应，测得的值是一个相对量而不是绝对量。

5.有辐射、污染等问题。

RIA虽然有上述缺点，但毕竟是定量分析方法的先进技术。随着科学技术的进步，放射免疫分析技术将会得到更广泛、更深入的发展。